Культура Грибов

[GROWER]

КУЛЬТУРА ГРИБОВ

Для выращивания грибов, содержащих псилоцибин и псилоцин, независимо от времени года и окружения, используют следующий способ. Прежде всего он используется для субтропического вида Psilocybe cubensis (Stropharia cubensis), богатого биологически активными веществами.

В чашках Петри и стаканах

  1. Получение спор с помощью отпечатка.
  2. Различные споры прорастают в нескольких местах одной и той же чашке для культуры, (монокариотные) зародышевые грибницы развиваются во всех направлениях, встречаются и объединяются, из них возникают способные к размножению (дикариотные) грибницы.
  3. Отдельные плодовитые (дикариотные) грибные волокна дальше.
  4. В большом объеме изготавливается наиболее полезная, чисто выращенная грибница.
  5. Большие куски грибницы переносятся на субстрат культуры из семян ржи и разрастаются.
  6. Культура накрывается землей, в грибнице появляются узелки, из которых развиваются грибы
  7. Сбор урожая.

Получение спор

  1. Отделить шляпку от ножки (ножом, скальпелем или безопасной бритвой).
  2. Шляпку положить спороносным слоем вниз на лист блестящнй, белой бумаги или стеклышко.
  3. Для защиты от смазывания и воздушного потока закрыть стаканом или чашкой Петри.
  4. Оставить на 24 часа.
  5. Осторожно снять стакан и шляпку.
  6. Hа подкладке виден отпечаток спор пурпурно - коричневого или черно - коричневого цвета. Споры упали со спороносного слоя и показали на бумаге звездообразное расположение спороносного слоя.

Прорастание спор

Чтобы могла возникнуть плодовитая (дикариотная) грибница, зародышевые грибницы должны встретиться и объединиться с двумя различными спорами. Используемые споры могут происходить от одной и той же шляпки.

  1. Простерилизовать чашку Петри гаровой питательной средой (см. "Стерилизация чашек Петри", стр. 39).
  2. Снять споровую палочку инокуляционной петлей. Для этого надо коснуться петлей отпечатка спор.
  3. Слегка приподнять крышку чашки Петри и коснуться петлей, к которой прилипли тысячи спор, трех - четырех мест.
  4. Снова сразу закрыть крышку.
  5. Hа точках инокуляции прорастают споры.
  6. Развиваются различные монокариотные (только одно клеточное ядро в каждой клетке) зародышевые грибницы, которые через 3 - 4 дня видны в виде белого пушка, который растет с мест прививки во все направления (радиально).
  7. Зародышевые грибницы двух инокуляционных точек встречаются, соприкасающиеся клетки обеих участвующих монокариотных грибниц соединяются в новую дикариотную клетку с двумя клеточными ядрами - мать неограниченно размножающейся и плодородной грибницы. Оплодотворение произошло.

Изолирование чистого штамма грибницы

Для разведения необходима только одна продуктивная, абсолютно чистая, дикариотная грибница.

  1. Слегка приподнять крышку чашки с зародышами.
  2. Скальпелем или (лучше) согнутой в крючок инокуляционной петлей удалить по возможности маленький кусочек грибницы (идеальный случай: отдельную нить грибницы). Чем меньше, тем чище.
  3. Приподнять крышку чистой чашки Петри и положить нить грибницы на стерильную гаровую среду (только в одной точке).
  4. Сразу закрыть крышку.
  5. Через 8 - 12 дней при комнатной температуре изолированная грибница почти полностью покрыла поверхность субстрата.
  6. Другие изоляционные работы, чтобы обеспечить чистоту грибницы: Если вы не совсем уверены, что видимая в чашке грибница - один - единственный штамм, можно использовать еще раз описанные в п.III. методы. Т.е.: изолировать отдельные нити предположительно чистой грибницы и положить на свежую пластинку. Через 8 - 12 дней должна развиться точно чистая грибница.

Изготовление больших объемов грибницы (запасы грибницы)

Чтобы можно было привить грибницу во много стаканов, полных субстрата ржи, изолированный, чистый штамм грибницы должен размножиться в большем масштабе.

  1. Выбрать лучшую чистую грибницу: сильный рост, без чужих зародышей (контаминанты), не старше 10 дней.
  2. Выбранную грибницу перенести на несколько свежих чашек Петри (поднять крышку, скальпелем или согнутой инокуляционной петлей снять кусочек грибницы, положить его в чашку и быстро закрыть ее. Инструмент снова простерилизовать и из чашки с выбранной грибницей снять другую пробу, которую перенести на другую свежую чашку и т.д.).
  3. Оставить на 3 - 5 дней при комнатной температуре. Грибница должна развиться известным способом (равномерно во все стороны - радиально) из точки инокуляции. Видна самое позднее через 4дня.
  4. Через 7 - 20 дней вся поверхность питательной среды покрыта грибницей.

Грибница на ржи

  1. Hаполнить субстратом ржи небольшую стеклянную банку для домашнего консервирования (или другой стеклянный сосуд с крышкой):
  * Количества для 0,5 л банки :
o 120 г (полчашки) целых зерен ржи (не посевную рожь, она может быть обработана фунгицидами)
o 2 г (1/2 чайной ложки) извести (СаСО3), напр., ракушечный известняк или кормовоую известь
o 0,2 г фосфата калия (К2РО4) (можно и не добавлять)
o 180 мл воды (почти полный стакан 0,2 л) водопроводной (хлор) или дистилированной (лучше)
  * Банка 1 л :
o 225 г ржи
o 275 мл воды
o 4 г извести
  2. Простерилизовать в кастрюле с давлением пара.
 1. наполнить кастрюлю на 2 см водой
 2. поставить туда банку (не подкладывать резину и не завинчивать крышку, консервировать не на до)
 3. довести воду до кипения с открытым вентилем
 4. закрыть вентиль, когда вода кипит
 5. варить на слабом огне 60 мин
 6. остудить
 7. снять крышку и вынуть банку.
  3. Разрезать полностью развившуюся чистую культуру грибницы стерильным ножом или скальпелем на кусочки по 1 - 2 кв. см.
  4. Кусочки грибницы брать по отдельности пинцетом и каждый класть в отдельную банку с субстратом ржи.
  5. Потрясти, чтобы кусочки грибницы и отдельные оторванные от нее грибные нити (Hyphen) попали во внутрь субстрата.
  6. Культуры хранить при очень высокой относительной влажночсти воздуха 95% и температуре 30 градусов в темном месте.
  7. Банки хранить в больших стиропоровых ящиках (можно получить у торговцев декоративными рыбками или как упаковочный мусор в больших магазинах). При обмене веществ грибницы освобождается тепло (как тепло нашего тела), которое сохраняется этим изолированным сосудом. Поэтому не нужно постороннее отопление. В крышке ящика надо сделать отверстие, которе потом заклеивается толстой пластиковой фольгой. Через это окошко можно наблюдать развитие внутри ящика.
  8. Через 3 - 4 дня виден рост грибницы на одном или нескольких местах.
  9. Через 4 дня, по меньшей мере на одном месте, должно быть видно вздутие грибницы диаметром 2 - 3 см, весь субстрат в банке надо сильно потрясти. Благодаря этому новообразованная грибница рвется на много мелких грибных нитей, которые - каждая для себя - снова представляет основу для роста грибницы.
  10. Оставить банки еще на 3 - 4 дня, грибница образуется на некоторых местах.
  11. Если через 6 - 8 дней не наблюдается достаточный рост грибницы, банку надо потрясти еще раз.
  12. Через 8 - 14 дней субстрат ржи должен полность покрыться грибницей. екотрые культуры достигают эту стадию уже через 6 дней, другим надо три недели и больше. Это зависит не только от силы роста грибницы (надо выбирать всегда быстрорастущие грибницы для размножения), но и от тепла, влажности и давления воздуха.

Закрывание  

Если банки полностью обросли грибницей, поверхность культуры покрывается на 1 - 2 см землей, чтобы гриб начал плодоносить.

  1. Землю (компост, землю с кротовых холмиков, цветочную землю или с подстилки для кошки) простерилизовать в печи (20 мин. при 200 град.С) или в кастрюле (30 мин.).
  2. Покрыть культуры землей на 1 - 2 см (полчашки ).
  3. Землю хорошо увлажнить, на ощупь она должна быть как выжатая губка. Годятся распылители воды а для поливкм цветов.
  4. Культуры оставить в стиропоровых ящиках.
  5. Банки ежедневно поливать 2 - 3 сильными струями воды.
  6. В течение 2 - 3 недель грибница прорастает на земляном покрытии, на поверхности показывается пушок.
  7. Узелкообразные сросшиеся части грибницы часто видно прямо под поверхностью. Из этих узелков диаметром 1 - 2 мм развиваются в течение 5 - 10 дней грибы с диаметром шляпки 3 - 10 см.
  8. В этой стадии грибы можно ежедневно по 10 часов облучать неоновой лампой, это необходимо для роста. Культуры не должны находиться долгое время на солнечном свете, т.к. ультрафиолетовое излучение вредит им.

Сбор урожая

  1. Сначала собирают маленькие или слишком плотно выросшие грибы. Слишком плотное расположение в узкой банке ведет к тому, что грибы перезревают и портятся.
  2. Иногда грибы из узелков грибницы растут вниз. Против этого покрыть люминиевой фольгой нижнюю часть банки. Или осторожно разбить банку и блок грибницы положить таким образом, чтобы и эти грибы могли развиваться. Держать сырой.

Пробирочная культура и капельная прививка

  Здесь - другой метод культуры, с помощью которой достигается более высокая стерилизация:

  1. Отпечаток спор на стерильной полоске стекла (опустить стекло в спирт, потом держать на открытом огне).
  2. Споры соскоблить в 10 мл стерильной воды.
  3. Потрясти пробирку. При необходимости разбавить 100 г стерильной воды.
  4. Hаполнить шприц водой со спорами.
  5. Привить чашку для зародышей спорами, по 1 капле в каждую инокуляционную точку.
  6. Изолировоть плодородные (дикариотные) нити грибницы и положить в пробирку, которая лежит наискосок и содержит гаровую питательную среду.
  7. Чистую грибницу в пробирке не разрезать(все равно не получится), пропитать стерильной водой.
  8. Hабрать шприц.
  9. Эту [еврей]кость ввести в субстрат ржи, 1 мл (30 капель) в каждую банку.

Рабочие материалы

o Чашки Петри: стеклянные чашки высотой 2 см и диаметром 6 - 12 см с крышкой чуть больших размеров.
o Инокуляционная петля: проволока, покрытая платиной и согнутая в петлю, которя вставлена в ручку (или в пробку).
o Агар: белый порошок, который смешивается с водой и кипятится. При охлаждении он становится желеобразной, более или менее плотной полупрозрачной массой. Как питательная основа для микробовых культур. Добывается из морских водорослей.
o Спиртовка: небольшая емкость для спирта, из которой выходит фитиль. Спиртовка горит без копоти. Для тушения огня - крышка.
o Дезинфецирующее средство: эрозоль или [еврей]кость. С остающимся действием или улетучивающаяся.

Все материалы можно получить в медпунктах, в магазинах по продаже лабораторного оборудования и во многих аптеках.

Агаровые питательные среды

Чтобы предоставить грибнице подходящую питательную среду, используют следующие смеси:

  1. В один литр кипящей воды добавить следующую смесь: (сначала взвесить и перемешать ингридиенты): - 20 г солодового сахара (порошок или сироп) - 20 г агара - 0,1 г кальция (СаСО3) - ракушечник, кормовой кальций - 0,1 г фосфата калия (К2РО4)
  2. Эта питательная среда для культуры грибов лучше всего показала себя: - 250 г неочищенного картофеля мелко порезать, быстро промыть под холодной водопроводной водой, 30 мин. кипятить в 1 л воды на слабом огне. Процедить отвар через полотенце, картофельные остатки выбросить. - 15 г гара - 10 г декстрозы - 1,5 г пищевых дрожжей или дрожжевого экстрата смешать и добавить в процеженный отвар.

Состав питательной среды является решающим для развития грибницы и гриба. Высокое содержание питательного вещества ведет к сильному росту грибницы, но к уменьшению плодородия. а средах, бедных питательными веществами, показывается слабый рост грибницы, но образуется много грибов.

Заражение

Все это кажется простым, но, к сожалению, это не так. изшие грибы и бактерии, споры которых находятся везде в воздухе, могут поразить культуры практически во всех стадиях развития и сделать их непригодными. Эти чужие зародыши, контаминанты, встречаются в разнообразных проявлениях, чаще всего можно установить зеленоватое или серое поражение на культурах. О каком бы загрязнении ни шла речь, зараженные культуры надо немедленно уничтожить. В виде исключения можно терпеть развитие абсолютно чистой белой грибницы, которая показывает только легкий голубоватый оттенок.

Стерильность

Чтобы оградить культуру от любого вида чужих зародышей, все шаги разведения от прорастания зародыша до развития гриба должны проводиться при условии абсолютной стеиилъности.

  1. Работать нужно в атмосфере с наименьщей вероятностью присутствия зародышей. Hе должно быть воздушного потока, котрый поднимает пыль. Защита дыхания. Кто хочет действовать абсолютно безопасно, должен построить особенный ящик, чтобы переносить грибницу из одной чашки Петри в другую или в банку со стерильной рожью. ОПИСАHИЕ. Если аинокуляционные работы проводятся под инокуляционным колпаком, надо продезинфицировать воздух внутри колпака эрозолем.
  2. Рабочее место надо протереть сильным дезинфицирующим средством.
  3. Все рабочие приборы, такие как нож, скальпель, инокуляционная петля надо стерилизовать перед каждым рабочим процессом в пламени спиртовки или над газовой плитой.
  4. Используйте простерилизованные резиновые перчатки.
  5. Как гаровую питательную среду (см. стр. 37), так и субстрат ржи надо прокипятить под давлением вакастрюле (скороварке), чтобы умертвить все зародыши.
  6. Все работы надо проводить по возможности быстро (сначала потренироваться). Крышку чашки Петри или банки надо закрывать сразу после инокуляции.

Все равно определенный процент культуры всегда заражается. Это практически неизбежно. Поэтому одновременно надо разводить достаточно много культур, чтобы поражение части культур не было так ощутимо. Предложение (10 -15 чашек Петри).

  1. Провести произрастание спор в 10 -15 чашках Петри.
  2. Изолировать несколько нитей грибницы в 4 - 5 зародышевых чашках. Другие чашки опустошить, по чистить, наполнить гаром, простерилизовать и использовать как изоляционные чашки.
  3. Выбрать две наилучшие грибницы, одну массово размножить, другую сохранить на всякий случай как резервную. Почистить другие изоляционные чашки и простерилизовать новым гаром, чтобы размножить в них выбранную грибницу.
  4. Все культуры с этой чистой грибницей, которые резать на кусочки 1 - 2 кв.см и по одному кусочку положить в каждую банку.

Стерилизация чашек Петри

  1. Наполнить кастрюлю с давлением пара на 2 - 3 см водой.
  2. Использовать подставку, напр., прочную проволочную решетку, под которую подкладывают 3 или 4 камешка, так что решетка находится над уровнем воды.
  3. Уложить подготовленные чашки Петри (3 - 4 мм гара, закрытые) на подставку, если необходимо, в несколько рядов.
  4. Довести воду до кипения. Вентиль остается открытым.
  5. Когда вода закипит и из вентиля пойдет пар, закрыть вентиль и оставить кипеть на 60 мин под легким давлением.
  6. Остудить и осторожно вынуть чашки Петри. Если открыть вентиль до этого, вода снова закипает из-за перепада давления.

Другие методы культуры

На компостной земле

Если вы хотите разводить грибы в большом объеме, стерилизация банок, наполненных рожью, в кастрюле с давлением пара занимает много времени и дорогостоящая. Можно некотрые культуры на ржи хорошо прорасти грибницей, чтобы потом ее перенести на стерилизованный навозный компост. Смесью из кусочков грибницы и компоста наполнить ящик. Грибы развиваются и можно собрать урожай.

  1. Молодым, но прогнившим навозным компостом, который был изготовлен скоростным способом (= перекладывание кучи через 7 дней, компост готов через 5 недель), наполнить жаропрочный сосуд (на пр., старые кастрюли или сковороды, разрезанные стальные листы или пластиковые пакеты, прдназначенные для жарения). Стерилизовать в печке при 130 град.С 30 - 60 мин.
  2. При этом образуется аммоний. Емкости, наполненные стерилизованным компостом, доливаются водой, причем газообразный аммоний вытесняется. Для удаления воды компост можно положить в емкость с дырками. Из кастрюль сливается вода, в то время как крышку нажимают на кастрюлю, чтобы компост не вывалился.
  3. Смешать рукой (надеть продезинфицированные перчатки) 36 л и 4 л субстрата ржи, полностью проросшего грибницей. Комки субстрата размельчить еще в банке стерильным ножом.
  4. Смесью из земли и кусочков грибницы наполнить любой большой ящик, желательно из стриропора, которые предварительно обработан сильным дезинфицирующим средством. Для удаления воды ящик надо выстлать сначала слоем из подстилки для кошек высотой 2 - 3 см или подобным материалом. В крышке ящика прорезать большое отверстие, которое заклеивается толстой пластиковой фольгой. Через это смотровое окошко можно наблюдать процессы на культуре.
  5. Оставить на 2 недели при комнатной температуре. Потом земля прорастает полностью грибницей, и поверхность тоже покрывается.
  6. Покрыть: Для закрывания культур взять смесь из 60% торфа и 40% ракушечника (стерилизовать при 200 г рад.С 40 мин. в печке), которую надо рассыпать на культуру слоем 1 см.
  7. Hамочить покрытие. а ощупь оно долно быть как выжатая губка. Использовать описанный поливатель цветов.
  8. Через 2 недели прежде всего на поверхности появляются маленькие узелочки грибницы.
  9. Культуру можно облучать только белым неоновым светом, трубки надо поднести близко к культуре. Это защищает от образования плодовых тел.
  10. Через неделю можно собирать урожай.
  11. Из выросших грибов выпадают споры, которые могут прорасти на покрытии. Чтобы избежать этого, между полувыросшими грибами на поверхность культуры кладут туалетную бумагу. Когда урожай собран, бумагу убирают и сжигают.
  12. Температура: подходящая температура 68 - 70 F, свыше 80 F вредит грибам. Если температура в культурах повышается, культуры можно охладить, закрепив клейкой лентой наполненную пластиковую бутылку (налить воду в бутылку и заморозить) под крышкой культуры.
  13. Слишком много воды или жары: здоровые грибы умирают и их ножки синеют.
  14. Слишком много воды: грибница заглушает маленькие грибы.

Выращивание на [еврей]ком питательном субстрате

Другой специальный метод - промышленное размножение грибницы на [еврей]ком или полу[еврей]ком питательном растворе.  Грибница Psilocybe cubensis (Stropharia cubensis) содержит 0,3% сухого веса псилоцибина и псилоцина. Вместо того, чтобы выращивать грибницу на твердой среде и собирать плоды, ее можно выращивать при постоянном проветривании также в резервуарах на [еврей]кой питательной среде. Подобные методы применяются в промышленном производстве пенициллиновых или других низших грибов. Эрготамин, основа ЛСД, добывается для коммерческих целей таким же путем. Если используется [еврей]кий субстрат, грибная культура убивается химическим способом, после этого начинается извлечение биологически активных и отделение их от ненужных веществ. Описанные методы выращивания, пожалуй, самые традиционные и уже широко распространены в США. В основном используются споры Stropharia cubensis (= Psilocybe cubensis), которые можно купить (источники поставок см. в приложении). Естественно, для дальнейшего размножения можно также использовать отечественные виды грибов. о в этом случае успех не всегда обеспечен, т.к. многие отечественные виды с трудом плодоносят. Hаиболее благоприятные условия их роста до сих пор не изучены экспериментально.  Много питательных веществ ведет к слишком большому росту грибницы, мало питательных веществ - к большему плодоношению. Хорошо подходит Paneolus sphinctrinus. Если вы уже сами собираете грибы, можно сэкономить много работ, при которых вы просто дальше размножаете нити грибницы от основания найденного экземпляра: - Взять с собой на луг стерильную чашку Петри с гаром, простерилизовать на газовой зажигалке инструмент (инокуляционную петлю или скальпель, их можно заменить согнутой безопасной булавкой или канцелярской скрепкой). Поднять гриб из земли, изолировать нити грибницы и положить в чашку. Шляпка и ножка тоже состоят из дикариотных клеток грибницы, которые можно культивировать дальше. Особенно хорошо подходят взятые из мякоти кусочки ткани: - Снять кожицу шляпки и вырезать пробу ткани, которая культивируется на гаре. Если возможно, взять грибницу из культуры друга, это лучше.Перенос грибницы: Можно выкопать кусок земли 30 х 30, минимум 10 см толщиной, на которой рос гриб, которая в любом случае должна быть проросшая грибницей. Ее можно перенести на похожее место, шансы, что это получится, все равно незначительные. адо обратить внимание на значение Р и удобрение (навоз телят и коров, в зависимости от вида свежий или сгнивший). Вид Stropharia/Hyphaloma/Psilocybe cyanescens растет на более чистой почве. Можно использовать возделанную землю для хвойных растений.

Взято с Пожалуйста войдите или зарегистрируйтесь чтобы увидеть ссылку.